實驗原理：
細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，須進行傳代再培養。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。
實驗材料與儀器：
1、需要進行傳代培養的細胞
2、0.25％ yidanbaimei工作液；RPMI 1640 培養基（含 10％ 小牛血清）
3、倒置顯微鏡，CO2 細胞培養箱、吸管、培養瓶/皿、 超凈工作臺、封口膜、酒精
實驗步驟
貼壁細胞：
1、材料選取與漂洗
選取生長密度 80%左右即處于生長對數期的HeLa細胞，在超凈工作臺中操作，吸去培養皿中的舊培養基，加入1-2 mL的PBS溶液，輕輕潤洗，漂洗細胞以除去殘留的血清。
2、yidanbaimei消化
向培養皿中加入足以覆蓋細胞層的0.25%yidanbaimei消化液（約1-2 mL）。將培養皿置于37℃、5% CO?培養箱中孵育 2-3分鐘（消化不夠，可適當延長時間）。倒置顯微鏡下實時觀察，大部分細胞形態變圓切邊緣透亮時，加入等體積含10%血清的wanquan培養基以終止消化反應。
3、細胞懸液制備與離心
用移液槍輕柔吹打細胞使其成為細胞懸液。將細胞懸液轉移到1.5ml離心管中，室溫，1000 rpm，離心 5 分鐘。
4、重懸與分盤
離心后，用吸引器輕輕吸去上清，加入1mlwanquan培養基重懸細胞，按照1皿細胞傳2皿或3皿比例進行傳代（不同細胞特性不同，分盤比例適當調整），將1皿細胞的細胞懸液一分為二或者一分為三后分別轉移到新的培養皿中。
5、標記與培養
接種好后，在新的培養器皿上標記好細胞名稱、傳代代數、操作日期及操作者姓名。輕輕搖勻后轉移至37℃、5% CO?培養箱中繼續培養。
6、觀察
培養24小時后，依據培養基pH指示劑顏色變化（如酚紅）及細胞生長密度，決定后續操作：更換新鮮培養基、繼續進行傳代或執行細胞凍存。
懸浮細胞或半貼壁細胞
1、制備細胞懸液
取狀態良好的細胞，在生物安全柜中操作，用移液管把細胞輕柔吹打均勻。
2、離心
把細胞懸液轉移到15 mL離心管中，1000 rpm離心5 min。
3、重懸
輕輕吸去上清后用wanquan培養基重懸細胞，按照1皿細胞傳2皿或3皿比例進行傳代，把細胞懸液一分為二或者一分為三后分別轉移到新的培養皿中。
4、標記與培養
接種好后，在新的培養器皿上標記好細胞名稱、傳代代數、操作日期及操作者姓名。輕輕搖勻后轉移至37℃、5% CO?培養箱中繼續培養。
5、觀察
細胞培養24 h后，根據培養基的顏色及細胞的生長密度進行后續相應的操作（更換新鮮培養基或者再次傳代處理或者進行凍存處理）。
